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血液相容性

血液相容性试验是评估医疗器械与血液接触时安全性和可靠性的重要实验方法。通过模拟人体血液循环，观察和评估医疗器械对血液成分的影响及可能引发的血栓形成、溶血反应等风险。该试验在保障人体健康和安全的同时，为医疗器械的设计、改进和质量控制提供了科学依据，促进医疗器械的研发和注册。

血液相容性的目的和意义：

目的：

血液相容性试验的目的是评估医疗器械与血液接触时的相容性和安全性。该试验旨在模拟医疗器械在人体内的实际使用情况，观察和评估医疗器械对血液成分的影响以及可能引起的血栓形成、溶血反应等风险。通过这种评估，可以判断医疗器械是否适合与血液接触，以及是否需要进一步改进设计或调整材料，以确保其不会对血液成分产生过度的反应，避免血栓形成、溶血等不良反应的发生。

意义：

血液相容性试验不仅在保障人体健康和安全方面具有重要意义，还为医疗器械的设计、改进和质量控制提供了科学依据。首先，通过该试验可以预测医疗器械在临床应用过程中可能对血液成分产生的影响，从而为产品的设计和改进提供依据。其次，试验结果可以评估产品在人体内的安全性和可靠性，降低不良反应的发生风险。此外，血液相容性试验的结果还可以为临床试验提供参考，为产品的研发和注册提供有力支持。同时，该试验也为其他安全性评估提供了有力的支持，如交叉配血试验等。

体外血栓形成：

使用健康普通级新西兰兔，根据试验用血量进行心脏采血。采血后即向阴性对照管加入血液，每管加入1.8mL，再加入0.2mL3.2%柠檬酸钠溶液，混匀备用。剩余的血液按25:1的比例加入3.2%柠檬酸钠溶液进行部分抗凝，混匀后向供试品管、参照品管和空白对照管交叉加入2ml部分抗凝血液，使材料全部被血液浸没，室温静止5～20min，期间观察供试品管、参照品管和空白对照管中血液的变化，待供试品管、参照品管或空白对照管内形成部分血栓时，即向供试品管、参照品管和空白对照管交叉加入0.1%肝素钠溶液200µL，混匀。室温静止10～15min后，将供试品管、参照品管、空白对照管和阴性对照管中的血液取出，置于冷冻离心机中，在4℃，2000g离心力条件下离心5min，取各管血浆用全自动凝血分析仪测定Fib含量。（注：Fib含量越低，说明血栓形成的量越多。）离心取血浆后，观察各管血栓形成的情况。

凝血酶原时间：

1、新鲜抗凝兔血制备：使用健康普通级新西兰兔，根据试验用血量进行心脏采血，按9:1的比例加入3.2%枸橼酸钠溶液进行抗凝，混匀，制备成新鲜抗凝兔血。

2、 向供试品管、参照品管和空白对照管中分别加入2.0mL新鲜抗凝兔血，使材料全部被血液浸没，混匀后放入台式恒温摇床中，在（37±1）℃条件下，60r/min动态接触15min。15min后取出所有试管，混匀后分离到新的聚丙烯塑料管，置于离心机中， 2000g离心5min，分离出血浆，取血浆用全自动凝血分析仪测定其PT值。

部分凝血激活酶时间：

1、贫血小板血浆（PPP）制备：使用健康普通级新西兰兔进行心脏采血，按9:1的比例加入3.2%柠檬酸钠溶液进行抗凝，充分混匀，制备成普通级新西兰兔新鲜抗凝全血，将抗凝全血以 2000g离心5min，分离出PPP。

2、将供试品管、参照品管、阳性对照管和空白对照管中分别加入2mL的PPP，使材料完全被浸没，混匀后放入台式恒温摇床中，在（37±1）℃条件下，60r/min动态接触15min。15min后从管中分离出血浆，用全自动血凝分析仪分别测定各管PTT值。

血小板粘附：

1、新鲜抗凝兔血：使用健康普通级新西兰兔，用含EDTA-K2抗凝剂的采血管根据试验用血量进行心脏采血，混匀，制备成新鲜抗凝兔血。

2、取1g直径1mm的玻璃珠，填入一根直径3mm、长120mm的聚四氟乙烯管中，两端分别用直径3mm、长20mm硅橡胶管嵌接。在嵌接处用直径2mm、长2mm的聚四氟乙烯管与一层尼龙网（160目）于聚、硅两管之间，以防玻璃珠漏出。制备3个玻璃珠柱为空白对照组；将玻璃珠涂以2%甲基硅油，按空白对照制备方法一致制备3个涂硅玻璃珠柱，作为阴性对照组。将供试品按0.2g/mL的比例，制成供试品溶液注入玻璃珠柱内，充满后驱出多余溶液，反复2次，经干燥后制备3个柱，作为供试品组。

3、取新鲜抗凝兔血0.5ml各3次，接着将血液以0.5ml/15s的速率通过各柱，分别对未通过及已通过玻璃珠柱的血液做血小板计数。

血小板计数：

1、新鲜兔血制备：使用健康普通级新西兰兔，根据试验用血量进行心脏采血，用EDTA-K2进行抗凝，充分混匀后待用；

2、向供试品管、参照品管和空白对照管分别加入2mL 新鲜兔血，使材料全部浸没，充分混匀后放入台式恒温摇床上，在（37±1）℃条件下，60r/min动态接触15min。15min后取出所有试管，充分混匀，分离管中血液到新的聚丙烯塑料管，在全自动五分类血细胞分析仪上测定血小板数量。

白细胞计数：

1、新鲜兔血制备：使用健康普通级新西兰兔，根据试验用血量进行心脏采血，用EDTA-K2进行抗凝，充分混匀后待用。

2、向供试品管、参照品管和空白对照管分别加入2mL新鲜抗凝兔血，使材料全部被血液浸没，混匀后放入台式恒温摇床上，在（37±1）℃条件下，60r/min动态接触15min 。15min后取出供试品管、参照品管和空白对照管，混匀，分离供试品管、参照品管和空白对照管中的血液到新的聚丙烯塑料管，最后用显微镜观察供试品管、参照品管和空白对照管分离后管中血液的白细胞形态，用全自动血细胞分析仪检测供试品管、参照品管和空白对照管分离后管中血液的白细胞数量。

溶血实验：

1、供试品组每管加入供试品5g，再加入氯化钠注射液10mL；阴性对照组每管加入氯化钠注射液10mL；阳性对照组每管加入蒸馏水10mL。每组平行操作3管。

2、全部试管放入恒温水浴中（37±1）℃保温30min后，每支试管加入0.2ml.稀释兔血，轻轻混匀，置（37±1）℃水浴中继续保温60min。倒出管内液体以800g离心5min。

3、吸取上清液移入比色皿内，用分光光度计在545nm波长处测定吸光度。

补体激活试验：

1、新鲜兔血清：使用健康普通级新西兰兔，根据试验用血量进行心脏采血，置于聚丙烯管中，室温血液自然凝固后置于离心机中，2000g离心5min，分离血清备用。

向供试品管、参照品管和空白对照管中分别加入2mL新鲜兔血清，然后将其放入恒温水浴锅中，在（37±1）℃条件下孵育60min，取出各组试管并置于冰浴中以阻止补体的进一步活化，然后将各管中的血清分离至新的聚丙烯管中，按照兔C3a酶联免疫分析（ELISA）试剂盒的说明书进行操作，使用酶标仪在450nm波长处测定各孔吸光度值，根据吸光度值计算出供试品组、参照品组和空白对照组C3a的含量。